RETRACCIÓN DEL COAGULO

RETRACCIÓN DEL COAGULO

Objetivo: Al termino de la practica del alumno sera capaz de realizar e interpretar la prueba de R.C.

Introducción: Puesto que el coagulo de fibrina encierra los elementos organizados (celulares) de la sangre  (in vitro e in vivo) el volumen de glóbulos rojos establece el limite inferior de la retracción de la fibrina. Por lo tanto, siendo normal los demás factores, el coagulo se retrae tanto mas cuanto menor es el hematocrito. La retracción es directamente proporcional al numero de plaquetas, e inversamente al hematocrito. Cuando las fibrinolinas son muy activas la fibrina puede casi disolverse tan rápidamente como se forma, y la retracción del coagulo se modifica en los trastornos de este tipo: choque, quemaduras etc.

Mide la cantidad de fibrina formada y su retracción: así como el numero de función de las plaquetas, pues poseen una proteína similar a la actomiosina, que produce la retracción del coagulo.

Material:

Tubos de ensaye para centrifuga

Alambre de 1 mm de grosor

Baño maría de 37°C

Equipo de venopuncion

Técnica

1. Se pone en un tubo de centrifuga graduado de 5 ml, de sangre venosa recién obtenida. Se lleva el alambre al fondo del tubo.
2. Se pone el tubo en el alambre, de un baño de agua a 37° C en donde se deja 1 hr. Después de la formación del coagulo sin tocarlo.
3. Se saca el alambre cuidadosamente y se deja escurrir dentro del tubo el coagulo unido al alambre durante 1 a 2 min.
4. Se lee el volumen del liquido que quedo en el tubo. El resultado se expresa como un porcentaje del volumen inicial de 5 ml.

Ejemplo: Si después de la coagulación 5 ml, de sangre suministraron  3 ml, de liquido.

La retracción es de

3X100

_____= 60 %

    5 

Valores normales 

Entre 48 y 64 %

Resultado 

2X100

______=40%

     5

Prueba De Rumpel-Leede

Prueba de Rumpel-Leede 

También llamada Prueba de lazo o torniquete, consiste en mantener elevada la presión en un miembro por un periodo de 5 minutos, con el lazo o manguito inflable del transiometro como para medir la T.A y comprimirlo con una presión menor que la sistolica pero mayor que la diastolica para producir estasis sanguínea en las venulas y capilares.

Material a estudiar : observación de la piel luego de interrumpir la circulación venosa. Se realiza el recuento de las plaquetas ( Pequeñas manchas hemorragicas en un circulode 5 cm de diámetro) normalmente no se debe producir mas de 5 petequias por debajo de la compresión, especialmente la cara palmar del antebrazo próxima al manguito nuematico. Mas de 10 petequias, y sobre todo extendidas mas aya del cuarto superior del antebrazo es patológico.

Tiempo insumido al paciente : 5 a 10 minutos.

Finalidad: Determinar la fragilidad de las paredes capilares, estimar la tendencia a la hemorragia. Ayuda  a reconocer la trombocitopenia.

Preparación previa: No es necesaria. No repetir en el mismo miembro antes de los 7 días.

RESULTADOS

Valores normales:  Ninguna petequia o hasta diez petequias en un area de 5 cm. Escala para informar el numero de petequias.

0 a 10 = 1+

10 a 20 = 2+

20 a 50 = 3+

50 o mas petequias  =4+

Valores aumentados: Pueden indicar coagulación intravascular difusa, disminución

del fibrinogeno, disminución de la protombina, deficiencia del factor VIII, trombocitopenia, tromboastenia, enfermedad de Von Willebrand, deficiencia de vitamina K, y puede estar asociado a afecciones no relacionados con los trastornos de la coagulación como escarlatina, hipertencion, diabetes, gripe, sarampión, escorbuto.

También es anormal la prueba en la trombopatias quizá debido a que por falta plaquetaria no hay vaso construcción adecuada ni formación de trombo blanco.

Confiabilidad de los resultados: Buena.

Medicamentos que pueden alterar los resultados: Corticoesteroides.

TIEMPO DE SANGRADO

TIEMPO DE SANGRADO

TIEMPO DE SANGRADO

OBJETIVO:

Que al termino de la practica realice el tiempo de sangrado por cualquiera de los dos métodos existentes.

INTRODUCCIÓN:

Un tiempo de sangrado normal indica una retracción normal de los capilares, y la existencia de un numero suficiente de plaquetas, con actividad normal.
La metamorfosis viscosa normal depende de un buen mecanismo extrinseco de producción de Tromboplastina, por lo tanto el tiempo de sangrado alarga en la insuficiencia del factor VIII. El tiempo de sangrado aumenta en forma característica en la purpura trombocitopenica.

METODOLOGÍA:

Se utiliza el método de Duke

Material:

Lanceta estéril
Torundas alcoholadas
Reloj cronometro
Papel filtro

Técnica

1.- Con una lanceta estéril, se practica en el borde inferior del lóbulo de la oreja una punción de 3 mm de profundidad se pone en marcha el cronometro.

2.- A intervalos de medio minuto, se aplica cuidadosamente sobre la gota de sangre el borde de un pequeño disco de papel filtro, cuidando de no tocar la piel. Esta maniobra por objeto es impedir que se forme un coagulo en la gota de sangre sobre la herida pues los tiempos de sangrado resultaran normalmente bajos.

3.- Utilizando una nueva zona de papel filtro para cada secado de medio minuto, puede tenerse un registro conveniente del tiempo total ( tiempo en minutos = numero de gotas divididas entre dos) se toma como punto final al momento en el cual el papel filtro ya no absorbe sangre.

METODO DE IVY

TECNICA:

1.- Se coloca alrededor del brazo un manguito de esfinometro con el cual se ejerce una presion de 40 mm de hg que debe permanecer durante toda la prueba.

2.- Utilizando una lanceta esteril se hace a intervalos cortos tres punciones ( entre 2.5 y 3.0 mm de profundidad) a lo largo de la cara flexora ( interna) el antebrazo , evitando las venas visibles se pone en marcha el cronometro.

3.- A intervalos de medio minuto, utilizando papel filtro se seca cuidadosamente cada gota de sangre en la misma forma que para el metodo de Duke, el punto final es el mismo.

TIEMPO NORMAL DE SANGRADO EN EL MÉTODO DE IVY

Entre 2 y 6 minutos ( maximo 7 minutos)

Nota: El tiempo de sangrado representa sencilla y útil ( aunque algo imprecisa ) de la eficacia de las funciones capilares y de plaquetas de la hemostasia. es preferible el método de IVY al de DUKE, pues las condiciones son mas constantes y se realizan en realidad tres pruebas.

PRÁCTICA DE VDRL - USR

Antígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en Suero sin inactivar, en Plasma y L. C. R. (no requiere reconstitución)

Agente de Diagnóstico

Introducción

Treponema pallidum, la bacteria que causa la sífilis, una enfermedad que generalmente se transmite por vía sexual.

Su diagnóstico puede ser serológico, con lo que se pueden determinar dos clases de anticuerpos:

1.    Tipo “cardiolipina”.- No treponema e inespecíficos

2.    Antitreponemas específicos

La prueba realizada Venereal Disease Research Laboratoy VDRL se le conoce como una prueba para sífilis no-treponemica. Es parte de la exploración inicial de la sífilis e iniciar un tratamiento. Con  el método cualitativo empleando la  placa presenta floculación, si se presenta el caso se lleva a cabo el método cuantitativo con el o los sueros positivos.

También se emplea en el cuidado prenatal del embarazo, así como parte de los estudios de laboratorio prenatales.

Reactivos y material proporcionado

-Antígeno en suspensión  estabilizada (VDRL)

-Control positivo

-Control negativo

-AGUJA No. 21sin bisel

-Pipetas  desechables (únicamente para presentaciones de 100 pruebas)

Estabilidad y almacenamiento del reactivo

El antígeno VDRL y los Sueros Controles  son estables hasta su  fecha de caducidad indicada en la etiqueta cuando de almacena de 2° a 8° C   NO CONGELAR.

Material y equipo necesario no proporcionado.

-Placa cóncava (indispensable)

-Agitador Mecánico

-Cronometro

-Microscopio

Obtención de la muestra

 

- Obtener 3 ml. de sangre por punción venosa.

- Centrifugar y separar el suero.

Método cualitativo.

1. En un anillo de la placa cóncava  depositar 0.05 ml de suero problema.
2.  En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otra por separado una gota de control negativo, extender sobre la superficie de los anillos
3.  Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado previamente resuspendido en cada una de las muestras utilizando la aguja  N.21 sin bisel.
4. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 min. Las pruebas realizadas en un clima extremadamente seco puede provocar la evaporación de las muestras; por lo tanto la placa en rotación puede ser cubierta con una tapa de caja petri húmeda previamente con grasa.
5.    Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10X.

INTERPRETACIÓN

1. Control Positivo
   
   
    Presencia de floculación  mediana o grande.
   
   
   Control Negativo
   
   
   Ausencia de floculación.
   
      
   Método cuantitativo.
   1.      Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.
   
   
   2.      Colocar en una gradilla 6 tubos  de 12 x 75 mm y numerarlos.
   
   
   3.      Agregar a cada uno 0.5 ml. de solución salina al 0. 9%.
   
   
   4.      Depositar 0.5 ml. de suero al tubo No.1 y mezclar.
   
   
   5.      Pasar 0.5 ml. del tubo No. 1 al tubo No.2 mezclar.
   
   
   6.      Pasar 0.5 ml. del tubo No.2 al tubo No. 3 mezclar.
   
   
   7.      Continuar con este proceso hasta el tubo 6.
   
   
   8.      Depositar 0.05 ml. de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la placa cóncava.
   
   
   9.      Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No.21 sin bisel a cada una de las  diluciones.
   
   
   10.  Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min.
                                                                                                       
   11.  Leer al microscopio con objetivo y ocular 10x.
   
   
    Interpretación.
   
   
   El título del suero problema será la última dilución que presente un resultado positivo. Ejemplo:
   
   
   Si se presenta floculación hasta el tubo 3 – dilución 1:8, por lo tanto el título será 1:8.
   
   
   1.      Nota: 
   Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.
   2.      
   Sueros débiles positivos y fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de prozona.
   3.      
   Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 min. puede secarse la reacción y dificultad en la interpretación.
   4.      
   El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.
   
   
   
   
   
   
   Conclusión
   Esta práctica nos sirve para identificar la enfermedad de transmisión sexual sífilis es una técnica inmunológica rápida y sencilla de realizar.

ROSA DE BENGALA

Antígeno Brucelar Amortiguado para elDiagnóstico de Brucelosis.

Introducción

Es una  prueba, basada en la aglutinación como respuesta a la presencia de alguna de las aglutininas de Brucella (abortus, mellitensis y suis). Bacterias causantes de la Brucelosis, organismos virulentos e infecciosos para el hombre que adquiere generalmente por vía mucocutánea, por consumir carne contaminada con la bacteria, abrasiones o cortes en la piel, inhalación de aerosol o contaminación de la conjuntiva; invadiendo el sistema linfático y puede alcanzar a diversos órganos.

Por ello se realiza la prueba de Rosa de Bengala por ser una prueba sensible y rápida que permite una aproximación diagnóstica inmediata.se empela sobre todo en las zonas no endémicas, como método de "despistaje". Emplea como antígeno una suspensión bacteriana a la que se ha añadido el colorante rosa de bengala, enfrentándola al suero sin diluir del enfermo.

 Material

§  Placa cóncava

§  Puntillas

§  Cronómetro

Equipo

Pipeta semiautomática

§Microscopio

Muestra

§  Suero

(Obtener 3 ml. de sangre por punción venosa, centrifugar y separar el suero)

Reactivo

§  Antígeno Rosa de Bengala

§  Control Positivo de Brucella

§  Control Negativo de Brucella

Procedimiento

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.

2. Utilizando la pipeta automática adicione 30 μL de la muestra del paciente en un círculo de la placa.

3. Mezcle suavemente el Antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo, después  coloque 30 μL en la placa de prueba, en el mismo círculo donde se colocó la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (Usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.

5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado.

 Nota: Después de este tiempo(4 min.) la lectura ya no es válida.

Resultado e interpretación

La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó a mezclar

Es el tiempo límite óptimo para la observación de ciertas aglutininas que se revelan lentamente puesto que se pueden presentar reacciones no específicas.

			Valores de referencia
Paciente 1	Negativo		CONTROL POSITIVO Presencia de aglutinación indica la existencia de anticuerpos específicos.
Paciente 2	Negativo		CONTROL NEGATIVO Ausencia de aglutinación.

Ambos resultados fueron negativos lo que indica que los pacientes no tienes Brucelosis o no han estado en contacto con la bacteria indicada.

Se pueden presentar falsos negativos, que se limitan a enfermos con procesos de pocos días de evolución y a algunos casos de enfermedad de curso muy prolongado.

NOTA: El aislamiento del agente etiológico mediante hemocultivos es de suma importancia.

Conclusiones

Esta prueba cualitativa de Rosa de Bengala es un método considerado eficaz en el diagnóstico de brucelosis, que permite dar al paciente un tratamiento en caso de que sea positivo el resultado, sin embargo por tratarse de una prueba cualitativa se debe comprobar con algunas otras como: Aglutinación Lenta Estándar o Aglutinación Lenta en Presencia de 2-Mercaptoetanol.

CONTEO DE LEUCOCITOS

INTRODUCCION

El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematología diagnostica. Para contar los leucocitos se diluye una cantidad exacta de sangre con el liquido de Turk, que es una solución hipotonica que destruye a los eritrocitos y conserva la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una cámara de Neubauer y se cuenta el numero de células en los cuadros indicados.

MATERIAL Y REACTIVOS 

1. Pipeta de Thoma para glóbulos blancos.

2. Una cámara de Neubauer.

3. Un microscopio.                                       

4. Solución de Turk.

5. Gasas.

6. Sangre venosa con EDTA.

PROCEDIMIENTO

1. Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectamente.

2. Aspirar sangre con la pipeta de Thoma hasta la marca 0.5.

3. Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absorbente.

4. Aspirar liquido de Thurk hasta la marca 11.

5. Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm.

6. Agitar la pipeta de Thoma de 3 a 5 min. y preparar la cámara con el cubrehematimetro.

7. Descartar las primeras 3 gotas y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematímetro, sin que se formen burbujas o sobrepasen los canales de la cámara.

8. Dejar reposar de 3 a 5 min. la cámara con la muestra.

9. Enfocar la cámara en 1 microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco débil en 64 cuadros de las 4 cuadriculas de los extremos.

10. Multiplicar el numero de leucocitos contados por 50.

     

     

                                      RESULTADO                                    

 Leucocitos 178.

178 x 50 = 8 900/mm3

VALOR DE REFERENCIA

5 000 a 10 000/mm3